微(wei)生物(wu)膜過濾系(xi)統(tong)操(cao)作(zuo)規程(cheng)詳(xiang)細分析(xi)

　　1.環境(jing)準(zhun)備：

　　在(zai)超凈(jing)工作(zuo)臺或生物(wu)安(an)全櫃(gui)中操(cao)作(zuo)，提前開(kai)啟(qi)紫(zi)外燈(deng)滅(mie)菌(jun)30分鐘，確(que)保(bao)操(cao)作(zuo)環境(jing)無(wu)菌。

　　檢(jian)查(zha)操(cao)作(zuo)臺面(mian)是否整(zheng)潔(jie)，避免雜物(wu)幹(gan)擾(rao)。

　　2.器(qi)材準備：

　　準備過濾(lv)系(xi)統(tong)主機(ji)、無(wu)菌濾(lv)杯、濾膜、濾膜底座(zuo)、無(wu)菌鑷(nie)子(zi)、無(wu)菌培養皿、真(zhen)空(kong)泵、無(wu)菌稀(xi)釋(shi)液（如生理鹽水或緩沖(chong)液）等(deng)。

　　檢查(zha)濾膜是否完整(zheng)無(wu)損(sun)，避免使(shi)用破(po)損(sun)濾膜導致假陰(yin)性(xing)結(jie)果(guo)。

　　3.個(ge)人防護：

　　穿戴無(wu)菌手(shou)套、口(kou)罩(zhao)和(he)實(shi)驗服，避免手(shou)或非(fei)滅(mie)菌物(wu)品(pin)接(jie)觸(chu)濾(lv)膜、濾器(qi)內壁(bi)及(ji)培養皿內部(bu)。

　　二、微(wei)生物(wu)膜過濾系(xi)統(tong)組(zu)裝過濾(lv)器(qi)

　　1.濾膜安(an)裝：

　　使用無(wu)菌鑷(nie)子(zi)夾取(qu)濾(lv)膜，確保(bao)光面(mian)朝(chao)上(shang)，平整(zheng)放置在(zai)濾(lv)膜底座(zuo)上。

　　安(an)裝濾杯並固定(ding)，確保(bao)濾杯與濾膜底座(zuo)之(zhi)間(jian)密封良好，避(bi)免漏(lou)氣(qi)導致過(guo)濾(lv)失敗(bai)。

　　2.連(lian)接(jie)真(zhen)空(kong)泵：

　　將真(zhen)空(kong)泵與濾杯通過(guo)管道(dao)連(lian)接(jie)，檢(jian)查(zha)連(lian)接(jie)處(chu)是否緊密無(wu)漏氣(qi)。

　　開(kai)啟(qi)真(zhen)空(kong)泵，檢查(zha)系(xi)統(tong)密封性(xing)，確(que)保(bao)無(wu)漏氣(qi)現(xian)象(xiang)。

　　三(san)、樣品(pin)過(guo)濾

　　1.樣品(pin)準(zhun)備：

　　混(hun)勻待(dai)檢(jian)測樣品(pin)，根據(ju)樣品(pin)微(wei)生物(wu)負荷情(qing)況適當(dang)稀釋(shi)（如高微(wei)生物(wu)負荷樣品(pin)需稀釋(shi)以降(jiang)低(di)濾膜堵塞風險(xian)）。

　　使用無(wu)菌操(cao)作(zuo)技術將樣品(pin)倒入濾(lv)杯中，體(ti)積(ji)通常(chang)不超過(guo)100mL/次(ci)。

　　2.過濾操(cao)作(zuo)：

　　啟(qi)動真(zhen)空(kong)泵，開(kai)始(shi)過濾樣品(pin)。若(ruo)樣品(pin)量(liang)較(jiao)大(da)，可分次(ci)過濾，避(bi)免濾(lv)膜堵塞。

　　觀察過(guo)濾(lv)速(su)度，若(ruo)過(guo)濾(lv)過(guo)慢(man)或無(wu)法(fa)過(guo)濾(lv)，檢(jian)查(zha)管路(lu)連(lian)接(jie)是否漏氣、濾杯密封性(xing)是否良好、樣品(pin)是否含有(you)較(jiao)多不溶性顆粒或懸浮(fu)物(wu)等(deng)。

　　3.過濾(lv)完成：

　　過濾完成後(hou)，關閉真(zhen)空(kong)泵。

　　使用無(wu)菌鑷(nie)子(zi)取(qu)出(chu)濾膜，註意避(bi)免手(shou)或非(fei)滅(mie)菌物(wu)品(pin)接(jie)觸(chu)濾(lv)膜表面(mian)。

　　四(si)、微(wei)生物(wu)膜過濾系(xi)統(tong)濾膜轉移與培養

　　1.濾膜轉移：

　　將(jiang)濾(lv)膜轉移至(zhi)預置(zhi)培養基的平板上(shang)，確(que)保(bao)濾膜與培養基緊(jin)密貼合(he)且(qie)無(wu)氣泡。

　　根據(ju)檢(jian)測微(wei)生物(wu)種(zhong)類(lei)選(xuan)擇(ze)合適的培養基。

　　2.培養條(tiao)件：

　　將培養皿倒置放入適宜溫(wen)度的培養箱(xiang)中培養。

　　細菌通(tong)常(chang)在(zai)37℃下培養24-48小時，真(zhen)菌(jun)在(zai)25-28℃下培養3-5天。具(ju)體(ti)培養時間和溫(wen)度根據(ju)檢(jian)測微(wei)生物(wu)種(zhong)類(lei)而(er)定(ding)。

　　五(wu)、微(wei)生物(wu)膜過濾系(xi)統(tong)結(jie)果(guo)觀(guan)察與計(ji)數(shu)

　　1.結(jie)果(guo)觀(guan)察：

　　培養結(jie)束後(hou)，取(qu)出(chu)培養皿觀察(cha)濾(lv)膜上生長(chang)的菌落(luo)情(qing)況。

　　使用無(wu)菌操(cao)作(zuo)技術對菌落(luo)進行計(ji)數(shu)和鑒(jian)定(ding)。

　　2.結(jie)果(guo)報(bao)告：

　　根據(ju)菌(jun)落(luo)計(ji)數(shu)結(jie)果(guo)和(he)樣品(pin)稀(xi)釋倍(bei)數(shu)計(ji)算樣品(pin)中微(wei)生物(wu)的含量和(he)種(zhong)類(lei)等(deng)信息(xi)。

　　報(bao)告結(jie)果(guo)時註明檢測方(fang)法(fa)、培養條(tiao)件、菌落計(ji)數(shu)結(jie)果(guo)及(ji)鑒(jian)定(ding)結(jie)果(guo)等(deng)信息(xi)。